СОСТОЯНИЕ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ЗВЕНЬЕВ ИММУНИТЕТА ПРИ КАНДИДА-АССОЦИИРОВАННОМ ПАРОДОНТИТЕ СО СРЕДНЕЙ И ВЫСОКОЙ СТЕПЕНЬЮ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ПАРОДОНТАЛЬНЫХ КАРМАНОВ
Аннотация и ключевые слова
Аннотация (русский):
Предмет. По мнению многих исследователей, изменение характера течения хронического генерализованного пародонтита связано с изменениями иммунного статуса пациента. В результате снижается колонизационная устойчивость, возрастает этиологическая роль условно-патогенных возбудителей, грибковых ассоциаций, которые воздействуют синергично пародонтопатогенными бактериями и способствуют развитию кандида-ассоциированного пародонтита. В связи с тем, что данное заболевание имеет малоспецифическую симптоматику, рецидивирующее течение не поддается к стандартной терапии, характерные нарушения в иммунной системе могут служить как диагностическим критерием, так и критерием оценки эффективности проводимого лечения. Однако до настоящего времени данный вопрос не изучался с учетом степени количественной обсемененности пародонтальных карманов грибами рода Candida, что явилось предметом настоящего исследования. Цель ― изучение состояния клеточного и гуморального звеньев иммунитета при обострении кандида-ассоциированного пародонтита со средней и высокой степенью обсемененности пародонтальных карманов грибами рода Candida. Методология. Проведено обследование клеточного и гуморального звеньев иммунитета 25 человек с интактным пародонтом и 60 пациентов с обострением кандида-ассоциированного пародонтита с учетом степени обсемененности пародонтальных карманов грибами рода Candida. Использованы современные и информативные иммунологические методы исследования, такие как Т- и В-лимфоциты и их субпопуляции, фагоцитарное звено, гуморальные факторы системного и местного иммунитета. Результаты. Проведенное иммунологическое исследование выявило, что обострение кандида-ассоциированного пародонтита сопровождается изменениями клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Выраженность и характер изменений зависят от степени обсемененности пародонтальных карманов грибами рода Candida. Выводы. Полученные данные об изменении показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета могут служить диагностическим критерием и критерием оценки эффективности проводимого лечения.

Ключевые слова:
клеточный и гуморальный иммунитет, ротовая жидкость, десневая жидкость, сывороточные иммуноглобулины, цитокины, лизоцим, фагоцитарная активность нейтрофилов
Текст
Текст произведения (PDF): Читать Скачать

Введение

            Хронический генерализованный  пародонтит (ХГП) является широко распространенным заболеванием, которое сопровождается разрушением связочного аппарата зуба, резорбцией костной ткани альвеолярного отростка и образованием пародонтальных и костных карманов, приводящих к патологической подвижности зубов, нарушению окклюзии,  в итоге потере зубов и снижению качества жизни [1―6]. В связи с этим данная проблема становится не только медицинской, но и социальной. В настоящее время предложено множество  методов ранней диагностики, профилактики и лечения данного заболевания. Тем не менее частота встречаемости пародонтита не снижается. Растет количество таких форм заболевания, которые протекают с частыми обострениями и трудно поддаются  лечению [7, 8].  На развитие и прогрессирование ХГП влияет множество факторов и среди них значительную роль играют вирулентность бактериальных патогенов, колонизационная устойчивость тканей пародонта и состояние ротовой полости [9―11]. Однако многие исследователи считают, что изменение характера течения пародонтита связано с изменением иммунного статуса пациента [12, 13]. При снижении иммунной реактивности организма снижается и колонизационная устойчивость тканей пародонта, также возрастает этиологическая роль условно-патогенных возбудителей, грибковых ассоциаций, которые воздействуют синергично пародонтопатогенными бактериями и способствуют развитию кандида-ассоциированного пародонтита [14]. Кандида-ассоциированный пародонтит имеет малоспецифическую симптоматику, рецидивирующее течение, не поддается стандартной терапии [15―22]. Выявление характерных для кандида-ассоциированного пародонтита нарушений в иммунной системе может служить как диагностическим критерием, так и критерием оценки эффективности проводимого лечения [23―25].  В связи с вышеизложенным изучение клеточного и гуморального звеньев иммунитета при кандида-ассоциированном пародонтите с учетом степени обсемененности пародонтальных карманов грибами рода Candida является актуальным.

            Цель исследования ― изучение состояния клеточного и гуморального звеньев иммунитета при обострении кандида-ассоциированного пародонтита со средней и высокой степенью обсемененности пародонтальных карманов грибами рода Candida.

            Материал и методы

Обследовано 25 человек с интактным пародонтом (контрольная группа) и 60 пациентов с кандида-ассоциированным пародонтитом в стадии обострения в возрасте от 18 до 59 лет разного пола. Больных  кандида-ассоциированным пародонтитом с учетом степени обсемененности пародонтальных карманов разделили на две группы: первую (I)  составили 30 человек со средней степенью обсемененности (>3<6 КОЕ/мл), вторую (II) ― 30 человек с высокой степенью обсемененности (>6 КОЕ/мл). У всех пациентов I и II групп, а также у лиц с интактным пародонтом исследовали абсолютное и относительное количество лимфоцитов, Е-РОК, М-РОК, СД3+, СД4+, СД8+, ИРИ, НСТ, лизоцим, ФИ, ФЧ, сывороточные иммуноглобулины А, М, G, иммуноглобулины А, М, G ротовой жидкости (РЖ) и десневой жидкости (ДЖ), а также цитокины РЖ.

Изучение иммунологического фенотипа лимфоидных клеток с использованием панели моноклональных антител (МКА) к антигенам различных кластеров дифференцировки проводили на люминесцентном микроскопе.

            Активность Т-клеточного звена иммунитета оценивали по количеству Т-лимфоцитов, которые определяли с помощью реакции спонтанного розеткообразования (Е-РОК) с эритроцитами барана. Идентификацию популяции зрелых Т-клеток проводили с использованием моноклональных антител к антигенам СД3, СД4, СД8 (Предприятие по производству бактериальных препаратов, г. Нижний Новгород) и серии ЛТ (Институт иммунологии Минздравмедпрома РФ, г. Москва).

            Активность В-гуморального звена иммунитета оценивали по количеству и функции В-лимфоцитов. Количество В-лимфоцитов определяли методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши (М-РОК). Функциональное состояние В-лимфоцитов изучали по уровням иммуноглобулинов крови. Количество иммуноглобулинов определяли методом простой радиальной иммунодиффузии в агаровом геле по Mancini с использованием моноспецифических стандартных антисывороток к человеческим IgA, IgM, IgG.

            Фагоцитарный процесс изучали по методу П.Я. Серебрийского с тест-культурой белого стафилококка (штамм 209) и оценивали по показателям фагоцитарного индекса (ФИ ― % фагоцитирующих клеток) и фагоцитарного числа (ФЧ ― среднее количество поглощенных частиц на один фагоцит).

            Окислительно-восстановительный потенциал нейтрофилов определяли в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест). НСТ-тест основан на пиноцитозе нейтрофилами раствора нитросинего тетразолия и накоплении его в фагоцитарных вакуолях с последующим восстановлением и превращением растворимого бесцветного НСТ в нерастворимый темно-синий формазан, который легко идентифицировать в нейтрофилах визуально. Каплю крови смешивали на предметном стекле с раствором НСТ, инкубирували при 37 оС в течение 30 минут, затем в предварительно окрашенном мазке просчитывали количество нейтрофилов, содержащих гранулы формазана.

            Состояние неспецифического иммунитета оценивали по уровню лизоцима в сыворотках крови нефелометрическим методом (по О.В. Бухарину) по способности его лизировать живую культуру лизогенного микрококка (Micrococcus lysodeycticus).

Для оценки естественной резистентности и специфической иммунной защиты полости рта проводили исследование уровня лизоцима слюны, содержания в РЖ иммуноглобулинов классов А, М, G и уровня секреторного IgA.

Иммуноглобулины в РЖ определяли методом простой радиальной иммунодиффузии в агаре. В реакции использовали моноспецифические стандартные антисыворотки к человеческим IgA, IgM, IgG, SIgA. Количество иммуноглобулинов рассчитывали в г/л.

Определение концентрации интерлейкина-4 (ИЛ-4), интерлейкина-6 (ИЛ-6), интерлейкина-12 (ИЛ-12) и интерлейкина-17 (ИЛ-17) в РЖ проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием наборов реактивов «Интерлейкин-6-ИФА-БЕСТ», «Интерлейкин-4-ИФА-БЕСТ», «Интерлейкин-17-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия) и «Интерлейкин-12+р40» (Life technologies, США). Количество выражали в пг/мл.

Количество иммуноглобулинов в ДЖ определяли методом радиальной иммунодиффузии в агаре. Для получения смывов из десневого кармана в него вводили 1-2 капли раствора Хенкса (рН 7,4) при помощи шприц-тюбика с тупой иглой, затем отсасывали и впрыскивали смывы в центрифужную полиэтиленовую пробирку. Для каждого исследования промывали 5-6 карманов. После центрифугирования собирали надосадочную жидкость, затем проводили определение уровня иммуноглобулинов.

Результаты всех исследований подвергались статистической обработке. Разницу считали достоверной при р<0,05.

Результаты и их обсуждение

Результаты исследования показали, что при кандида-ассоциированном пародонтите как средней, так и высокой степени количественной обсемененности пародонтальных карманов грибами рода Candida происходят изменения клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Так, при средней степени обсемененности наблюдается достоверное повышение суммарных лимфоцитов. При этом относительное количество лимфоцитов составляет 37,54±1,21 %, при контроле ― 27,9±0,21 %, а абсолютное количество ― 2,14±0,13, при контроле ― 1,59±0,12, то есть абсолютное количество лимфоцитов повышается в 1,3 раза. Также отмечены повышение относительного и абсолютного количества В-лимфоцитов с М-рецепторами в 2 и 2,2 раза соответственно и снижение относительного и абсолютного количества Е-РОК (35,08±1,73 %, при контроле ― 63,9±1,59 % и 0,59±0,03, при контроле ― 1,2±0,08 соответственно). При высокой степени обсемененности количество В-лимфоцитов меняется идентично средней степени обсемененности. Также отмечены изменения показателей СД3+, СД4+, СД8+ клеток и ИРИ. При средней и высокой степени количественной обсемененности пародонтальных карманов грибами рода Candida относительное и абсолютное количество СД8+ клеток увеличивается, тогда как СД3+ и СД4+ клеток увеличивается только абсолютное количество, а относительное значительно уменьшается (р<0,05). Следовательно, уменьшается ИРИ.

            Помимо иммунокомпетентных клеток Т- и В-лимфоцитов, активными участниками иммунных реакций являются фагоцитирующие клетки, особенно нейтрофилы. Передача информации от фагоцитирующих клеток антигенреактивным является необходимым условием развертывания большинства реакций. При обострении кандида-ассоциированного пародонтита нами были выявлены существенные изменения в фагоцитарной активности нейтрофилов. Так, фагоцитарный индекс в контрольной группе составил 69,9±1,23, а у пациентов I и II групп снизился до 22,02±0,0 и 21,32±1,03 соответственно. Следовательно, уменьшилось и фагоцитарное число (4,92±1,01 ― контроль; 3,21±0,002 и 3,13±0,37 ― у пациентов  I и II групп соответственно). Также снизилось относительное количество нейтрофилов, способных восстанавливать НСТ, как в I, так и во II группе. Интенсивность снижения была пропорциональна степени количественной обсемененности пародонтальных карманов. Снижение фагоцитарной активности нейтрофилов, их функциональная неполноценность способствуют инвазии Candida spp. и тяжелому течению микозов.

            Значительно снизился также уровень лизоцима крови в обеих группах (р<0,05).

            Высокой предрасположенностью к заболеваниям, вызванным Candida spp., обладают лица с дефицитом выработки иммуноглобулинов, в особенности класса А. Согласно нашим исследованиям, дефицит сывороточного IgA отмечался у обеих групп больных, в то время как  концентрация IgG и IgM была повышена (табл. 1).

            При обострении кандида-ассоциированного пародонтита также наблюдались изменения местного иммунитета. Так, в РЖ отмечалось снижение уровня лизоцима и  концентрации иммуноглобулинов A и SIgA, повышение IgG у больных обеих групп, а в ДЖ ― появление IgM и IgG, в то же время отсутствовал IgA и SIgA, тогда как в контроле отсутствуют иммуноглобулины всех классов.

            Интересные данные получены при изучении цитокинов ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-12 и ИЛ-17. При средней степени количественной обсемененности пародонтальных карманов  грибами рода Candida по сравнению с контролем выявлено значительное повышение уровня провоспалительного цитокина ИЛ-6 и противовоспалительного цитокина ИЛ-4, а уровень ИЛ-17 и ИЛ-12 был понижен. У больных же II группы отмечались достоверное повышение уровня ИЛ-17 и ИЛ-12 и понижение уровня ИЛ-6 и ИЛ-4 (табл. 2).

            Выводы

Таким образом, кандида-ассоциированный пародонтит в стадии обострения сопровождается выраженными изменениями клеточного и гуморального звеньев иммунитета и характеризуется повышением относительного и абсолютного количества суммарных лимфоцитов, понижением относительного и абсолютного количества Т- лимфоцитов, повышением относительного и абсолютного количества В-лимфоцитов, образующих розетки с эритроцитами мыши, иммунноглобулинов М, G.

Таблица 1

Показатели системного иммунитета при кандида-ассоциированном пародонтите с различной степенью количественной обсемененности пародонтальных карманов грибами рода Candida (M±m)

Table 1. Indicators of systemic immunity in candida-associated periodontitis with varying degrees of quantitative seeding of periodontal pockets with fungi of the genus Candida

№ п/п

Показатели

 

Интактный пародонт

I группа

 

II группа

1

Лимфоциты

%

 

27,9±0,21

37,14±1,01*

39,8±0,02*

абс.

1,59±0,12

2,13±0,13*

2,48±0,01*

2

Е-РОК

%

63,9±1,59

35,01±1,73*

33,02±0,02*

абс.

1,2±0,08

0,59±0,02*

0,49±0,02*

3

М-РОК

%

10,2±4,5

23,4±1,6*

24,10±0,02*

абс.

0,21±0,03

0,46±0,01*

0,49±0,02*

4

СД3+

 

%

65,9±1,3

37,01±0,07*

36,3±0,01*

абс.

1,24±0,07

1,82±0,31*

1,93±0,01*

5

 

СД4+

 

%

40,5±1,1

28,79±0,09*

28,97±0,01*

абс.

0,79±0,04

0,92±0,01*

0,96±0,09*

6

СД8+

 

%

 

26,1±0,85

31,06±0,91*

33,20±0,01*

абс.

0,51±0,03

0,81±0,07*

0,84±0,02*

7

СД4+/СД8+

 

1,55±0,03

1,14±0,12*

1,14±0,01*

8

Фагоцитоз

 

ФИ

69,8±1,23

22,01±0,01*

21,31±0,03*

ФЧ

4,92±1,01

3,21±0,01*

3,12±0,07*

9

НСТ %

10,9±0,05

3,40±0,01*

3,36±1,17*

10

Лизоцим крови (мкг/мл белка)

8,75±0,53

5,01±0,002*

4,74±1,03*

11

IgA

3,1±0,3

2,5±0,003*

1,19±0,03*

IgM

1,2±0,3

4,91±0,01*

5,10±0,73*

IgG

13,9±0,8

19,09±0,01*

22,64±0,61*

                 

            Примечание: * ― достоверное различие по сравнению с интактным пародонтом (р<0,05).

            Таблица 2

Показатели местного иммунитета при кандида-ассоциированном пародонтите с различной степенью количественной обсемененности пародонтальных карманов грибами рода Candida (M±m)

Table 2. Indices of local immunity in candida-associated periodontitis with varying degrees of quantitative seeding of periodontal pockets with fungi of the genus Candida

№ п/п

Показатели

Интактный пародонт

I группа

II группа

 

Иммуноглобулины РЖ

Ig A

IgM

IgG

S IgA

 

 

0,18±0,001

-

0,28±0,01

0,26±0,01

 

 

 

0,09±0,01

-

0,38±0,01

0,18±0,01

 

 

0,07±0,01

-

0,54±0,01

0,12±0,01

 

Цитокины РЖ

ИЛ-4

ИЛ-6

  ИЛ-12

  ИЛ-17

 

8,63±1,07

12,91±1,03

18,97±1,12

15,03±1,24

 

140,01±5,6

150,2±4,21*

8,38±0,91

5,91±0,89

 

 

4,22±0,02

8,12±0,001

58,12±0,09

47,02±0,01

 

 

Иммуноглобулины ДЖ

IgA

IgM

IgG

  SIgA

 

 

 

-

-

-

-

 

 

-

0,41±0,02

3,01±0,01

-

 

 

-

0,53±0,03

5,1±0,03

-

            Примечание: * ― достоверное различие по сравнению с интактным пародонтом (р<0,05).

Также для него характерны дисбаланс субпопуляций Т-лимфоцитов клеток (СД4+, СД8+), снижение фагоцитарной активности нейтрофилов, ФЧ, относительного количества нейтрофилов, способных восстановить НСТ. Местный иммунитет также претерпевает изменения и характеризуется дисбалансом цитокинов в РЖ, понижением уровня IgA и SIgA, снижением лизоцима, повышением IgG  в РЖ и появлением в ДЖ иммуноглобулинов М и G. Полученные данные могут быть использованы при диагностике кандидо-ассоциированного пародонтита и для критерия оценки эффективности лечения.

Список литературы

1. Тарасова, Ю. Г. Характеристика показателей качества жизни у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом различной степени тяжести / Ю. Г. Тарасова, М. В. Мосеева // Проблемы управления здравоохранением. – 2011. –№ 5. – С. 85–87.

2. Мартиросян, В. Г. Клинико-микробиологические особенности диагностики хронического генерализованного пародонтита / В. Г. Мартиросян, Н. В. Плескановская, Л. Н. Николаева // Российский стоматологический журнал. – 2012. – № 4. – С. 29–34.

3. Michikawa, M. Periodontal disease / M. Michikawa // Nihin Rinsho. – 2014. – Vol. 72, № 4. – P. 744–748.

4. Златкина, А. Р. Кандидоз кишечника как новая проблема гастроэнтерологии / А. Р. Златкина, В. А. Исаков, И. О. Иваников // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2001. – № 6. – С. 33–38.

5. Грудянов, А. И. Заболевания пародонта / А. И. Грудянов. – Москва : МИА, 2009. – 336 с.

6. Блашкова, С. Л. Распространенность микробных ассоциаций при пародонтите у больных с сердечно-сосудистой патологией / С. Л. Блашкова, Е. М. Василевская, Е. Н. Жалько // Пародонтология. – 2015. – Т. ХХ, № 1 (74). – С. 3–6.

7. Baelum, V. Periodontal disease epidemiology – learned and unlearned. / V. Baelum, R. Lopez // Periodontol 2000. – 2013. – Vol. 62, № 1. – P. 37–58.

8. Periodontitis among aged > 30 years – United States, 2009-2010 / G. Thornton–Evans, P. Eke, L. Wei [et al.] // MMWR Survrill Summ. V. – 2013. – Vol. 62, Suppl. 3. – P. 129–135.

9. Факторы местной резистентности и иммунологической реактивности полости рта. Способы их клинико-лабораторной оценки (обзор литературы). Часть II. / Л. М. Цепов, Л. Ю. Орехова, А. И. Николаев, Е. А. Михеева // Пародонтология. – 2005. – № 3 (36). – С. 3–9.

10. Kinane, D. F. Host-response: understanding the cellular and molecular mechanisms of host-microbial interactions-consensus of the Seventh European Workshop on Periodontology / D. F. Kinane, P. M. Preshaw, B. G. Loss // J Clin Periodontal. – 2011. – Vol. 38, Suppl. 1. – P. 44–48.

11. Hasturk, H. Paradigm shift in the pharmacological management of periodontal diseases / H. Hasturk, A. Kantarci, T. E. Van Dyke // Front Oral Biol. – 2012. – Vol. 15. – P. 160–176.

12. Патология пародонта при заболеваниях желудочно-кишечного тракта (обзор литературы) / А. В. Лепилин, А. В. Еремин, Л. Ю. Островская, О. В. Еремин // Пародонтология. – 2008. – № 4. – С. 10–17.

13. Патогенетический подход к лечению полиморбных больных с хроническими очагами инфекции в полости рта и ЛОР –органах / Л. Ю. Орехова, И. А. Горбачева, Л. А. Шестакова [и др.] // Пародонтология. – 2010. – № 4. – С. 16–19.

14. Lessons learned and unlearned in periodontal microbiology / R. Teles, F. Teles, J. Frias–Lopez [et al.] // Periodontol 2000. – 2013. – Vol. 62, № 1. – P. 92–162.

15. Богомолова Т. С. Признаки, характеризующие вирулентность Кандида альбиканс / Т. С. Богомолова, Г. И. Горшкова // Материалы II Международного микологического симпозиума «Микозы и иммунодефициты». – Ленинград, 1991.

16. Белоклицкая, Г. Ф. Хлоргексидин-содержащий ополаскиватель «Корсодил» в практике терапевтической стоматологии / Г. Ф. Белоклицкая // Современная стоматология. – 2004. – № 3. – С. 17–21.

17. Бурова, С. А. Современные представления о грибковой патологии пищеварительного тракта / С. А. Бурова // Лечащий врач. – 2005. – № 6. – С. 52–56.

18. Бондаренко, В. М. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы : руководство для врачей / В. М. Бондаренко, Т. В. Мацулевич. – Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2007.

19. Клинико-лабораторные ассоциации персистенции кандидозной инфекции при сахарном диабете / Е. В. Герасимова, Ю. В. Несвицкий, Н. М. Майорова [и др.] // Вестник Рос. Академии мед. наук. – 2010. – № 2. – С. 13–16.

20. Булкина, Н. В. Новые аспекты проведения лечебно-профилактических мероприятий у больных кандидозом полости рта / Н. В. Булкина, А. Д. Панченко // Саратовский научно – медицинский журнал. – 2011. – Т. 7, № 1. – С. 319–321.

21. Леонова, Л. Е. Оценка эффективности комплексного лечения больных пародонтитом на основании клинико-рентгенологических и биохимических показателей / Л. Е. Леонова, А. А. Ковтун, Г. А. Павлова // Пермской медицинский журнал. – 2013. – Т. 30, № 2. – С. 103–108.

22. Новые подходы к лечению воспалительных заболеваний пародонта / О. С. Гилева, Е. А. Бондаренко, Н. В. Гибадуллина [и др.] // Уральский медицинский журнал. – 2011. – № 5 (83). – С. 22–27.

23. Biswas, S. K. Anaerobic growth of Candida albicans does not support biofilm formation under similar conditions used for aerobic biofilm / S. K. Biswas, W. L. Chaffin // CUIT. Microbiol. – 2005. – Vol. 51, № 2. – P. 100–104.

24. Williams, A. Oral Microbiology and immunology / A. Williams, M. Yanagisawa. – 2007. – № 22. – P. 285–288.

25. Быкова, Н. И. Показатели клеточного и гуморального иммунитета при экспериментальном воспалении тканей пародонта / Н. И. Быкова, А. В. Одольский, В. А. Григорян // Кубанский научный медицинский вестник. – 2016. – № 6 (161). – С. 20–26.


Войти или Создать
* Забыли пароль?